偶联多种单链抗体免疫纳米微粒的制备方法及鉴定

目的 建立一种多单链抗体修饰氧化铁纳米微粒的方法.方法 利用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)及羧基(COOH group)修饰的氧化铁纳米微粒(Iron Oxide Nanoparticles,IONPs),以及抗MUC4、抗CEACAM6及抗CD44v6单链抗体(Single chain antibodies,scAbs),通过EDC/Sulfo-NHS交联剂将IONPs-PEG与3种scAbs进行交联,构建IONPs-PEG-multi scAbs复合物,再利用zeta粒度仪、透射电子显微镜(TEM)对IONPs-multi scAbs复合物进行表征,同时,在IONPs-PEG表面偶联荧光抗体,通过荧光强度测定其偶联效率;再鉴定复合物的抗原识别特异性及在放置1个月、6个月后评估复合物水溶液稳定性.结果 偶联3种scAbs后,IONPs-PEG-multi scAbs复合物的平均粒径为(23.6±0.5)nm,粒径分布集中,zeta电位约(-17.3±06)mV;TEM显示粒径约10 nm,荧光强度测定结果提示抗体偶联效率约为75％,细胞免疫荧光实验结果提示IONPs-PEG-multi scAbs复合物对高表达MUC4、CEACAM6及CD44v6分子的胰腺癌细胞BxPC-3具有特异性识别能力,证实该复合物具有良好的抗原识别特异性;在放置1个月、6个月后,偶联复合物的溶液分散性良好,放置6个月后平均粒径约(23.9±0.8)nm,zeta电位约(-17.6±0.4)mV,TEM拍照提示粒径约10 nm,细胞免疫荧光提示复合物抗原识别特异性良好.结论本研究利用EDC/Sulfo-NHS交联剂组合,将3种单链抗体交联到PEG和羧基修饰的IONPs表面,构建IONPs-PEG-multi scAbs复合物,该方法偶联效率高,且复合物具有粒径小、分散性好、抗原识别特异性及水溶液稳定性好的特性.