密码子优化IL-18基因的合成与蛋白质高表达

目的：为研究IL-18密码子优化合成与蛋白质高表达，更好的发挥IL-18在基础研究与临床中的应用，本研究采用野生型IL-18在大肠杆菌中表达高频率的密码子，自行设计8个PCR片段，用PCR；方法：得到IL-18的cDNA，利用EcoR I双酶切将其插入pGEX-4T-1载体中，转化大肠杆菌JM109。筛选出阳性菌落，提取质粒，转化大肠杆菌BL-21 DE3中进行表达，纯化。结果：显示：经纯化所获得的优化IL-18的氨基酸序列、生物学活性与野生型IL-18完全一致，蛋白质产量较野生型IL-18高约5倍。结论：本研究可以实现较高水平的蛋白质，也给纯化带来了方便，为大规模生产提供了较理想的表达株，同时为治疗性疫苗研究奠定了基础。