色素上皮衍生因子对高剂量地塞米松作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体表达的影响

目的 观察色素上皮衍生因子(PEDF)对高剂量地塞米松(DEX)作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 将体外培养的MC3T3-E1细胞分为5组,分别为对照组、DEX(10-6mol/L)组、PEDF干预DEX组,PEDF干预DEX组又按照加入的PEDF分为3个浓度组,依次为2、10、50nmol/L组.各组细胞培养14d时采用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,进行细胞染色[碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色]及通过免疫荧光法检测OPG及RANKL的表达,并运用Western blot检测细胞OPG及RANKL蛋白的表达.结果 成骨细胞 ALP染色呈阳性,免疫荧光化学检测RANKL、OPG表达阳性.在高剂量DEX作用下,MC3T3-E1细胞发生明显成脂转分化,而PEDF的干预明显地抑制了这种转分化.与对照组(0.790±0.020)比较,高剂量DEX组(0.910±0.015)明显地上调了RANKL的表达水平(P=0.008).加入PEDF后,RANKL的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性下调.而OPG的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性地增高.对比各组OPG/RANKL的表达水平,与 DEX组(0.560±0.012)比较,PEDF干预DEX各亚组的OPG/RANKL的表达水平(0.821±0.025、1.290±0.018及1.405±0.120)随着PEDF的加入出现显著上调(P=0.003、0.000、0.019).结论 PEDF可有效地逆转高剂量DEX导致的成骨细胞成脂转分化,并且上调成骨细胞的OPG/RANKL的表达水平,从而保护成骨功能.