重组分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体腺病毒对前列腺癌细胞增殖的影响

目的 构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的腺病毒载体,观察TRAIL基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响.方法 采用基因合成的方法获得含有分泌型信号肽的TRAIL基因,连接入GV315载体,在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增.以构建好的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3.采用间接免疫荧光法检测腺病毒感染后PC-3细胞中TRAIL表达的变化.Western blot检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-8表达的变化,通过平板克隆实验、细胞生长实验检测TRAIL对PC-3细胞增殖能力的影响.结果 成功构建重组分泌型腺病毒载体Ad-sTRAIL.PC-3细胞经Ad-sTRAIL感染后TRAIL蛋白表达水平明显增加,并且active-Caspase-3和active-Caspase-8的表达明显增加.平板克隆实验结果显示Ad-sTRAIL组克隆形成率[(30.60±2.10)％]明显低于Control组[(46.60±4.86)％,q=7.56,P＜0.01]及Ad-LacZ组[(45.90±3.56)％,q=7.19,P＜0.01].噻唑蓝(MTT)实验结果显示Ad-sTRAIL对PC-3细胞的抑制作用自48 h后(20.15％)差异有统计学意义(q=6.82,P＜0.01).结论 通过重组分泌型TRAIL腺病毒载体Ad-sTRAIL使PC-3细胞表达TRAIL基因,并可增加active-Caspase-3和active-Caspase-8的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖.