人结肠癌血管特异结合短肽的噬菌体肽库筛选及鉴定

目的 建立小鼠结肠癌模型,筛选并鉴定能够与人结肠癌血管内皮细胞特异结合的噬菌体呈现短肽.方法 建立小鼠荷瘤模型.鉴定阳性噬菌体的体内归巢能力及内皮细胞结合能力.人工合成噬菌体呈现短肽,通过竞争结合实验观察短肽对其呈现噬菌体的竞争结合抑制作用.并检测短肽与共培养内皮细胞及结肠癌血管的特异性结合能力.结果 鉴定出两种外源肽噬菌体,称为pCV1及pCV2.体内实验显示,pCV1、pCV2均能特异性归巢于人结肠癌移植瘤组织,滴度比值pCV1/pCont、pCV2/pCont分别为15.9、20.1倍,明显高于对照组织.体外细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示pCV2在Co-HUVECs上的结合显著高于在HUVECs上的结合,其比值达2.61.人工合成短肽CV2能特异性竞争抑制pCV2向结肠癌移植瘤内的归巢及与Co-HUVECs的特异性结合.免疫荧光染色结果显示,FITC-CV2特异性结合于Co-HUVECs的胞膜与核周胞质,以及结肠癌移植瘤的血管组织.结论 得到两个能特异性结合于结肠癌移植瘤的噬菌体单克隆pCV1及pCV2.pCV2能够特异性结合于Co-HUVECs,pCV2所呈现的环状九肽CV2介导了它与Co-HUVECs的特异结合.短肽CV2具有与Co-HUVECs及结肠癌移植瘤血管特异性结合的能力,有可能用于结肠癌的血管靶向治疗.