乳腺癌T7噬菌体展示cDNA文库的构建

目的 构建乳腺癌组织T7噬菌体展示cDNA文库,为下一步筛选差异蛋白打下基础.方法 利用乳腺癌新鲜标本,提取总RNA,分离mRNA并进行纯化,然后合成cDNA,连接体外包装获得T7噬菌体展示cDNA文库.结果 总RNA经检测,A260/A280=1.87,纯化的mRNA产量为4.0μg,A260/A280=1.91,合成的cDNA大小在200~6 000 bp之间,原始文库的容量为2×107pfu,文库重组率为90%,插入片段长度在300~2 000 bp之间.结论 噬菌体展示技术是进行蛋白质功能研究的高效方法,构建高质量的乳腺癌噬菌体展示cDNA文库,可用于肿瘤标志物的筛选、肿瘤疫苗的研制、多肽药物的开发、靶向治疗的研究等众多领域.