活性氧影响SKOV3细胞间充质转化及其机制研究

目的:探讨活性氧(ROS)对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞的间充质转化的影响及其中可能存在的分子机制.方法:①通过采用ROS生成剂大黄素(Emodin)、ROS清除剂二硫苏糖醇(DTT)调节卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞内ROS水平,采用PCR技术及蛋白印迹法测定3组(Emodin组、DTT组、对照组)细胞中间充质转化标志分子E钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA及蛋白的表达,比较细胞株侵袭转移能力.②结合改变活性氧水平,构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的化学合成,小干扰RNA(SiRNA)沉默HIF-1α表达(HIF-1α SiRNA组、DTT组、对照组),比较HIF-1αmRNA的表达.③使用赖氨酰氧化酶(LOX)抑制剂β-氨基丙腈(β-APN)抑制LOX表达,观察各组(Emodin组、DTT组、β-APN组、Emodin+ β-APN组、对照组)细胞HIF-1α、LOX、E-cadherin mRNA及蛋白表达.结果:①SKOV3细胞Emodin组ROS水平较对照组明显升高[(164.85±8.93)％vs(97.42±6.47)％,P＜0.01,E-cadherin mRNA及蛋白的表达均较对照组显著降低(P＜0.05),Emodin组的细胞侵袭率高于对照组[(19.48 ±0.49)％ vs(10.74±2.38)％,P＜0.01],而DTT组结果与之相反,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).②HIF-1α SiRNA作用下,HIF-1αSiRNA组的HIF-1αmRNA表达较对照组降低(0.20 ±0.09 vs 0.87 ±0.10,P＜0.05),LOX mRNA表达较对照组降低(0.40±0.08 vs 3.76±0.66,P＜0.05),而E-cadherin mRNA表达较对照组增高(1.01 ±0.15 vs0.30±0.09,P＜0.05).DTT组的效果较HIF-1α SiRNA组更为显著,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).③3-APN作用下,[β-APN组的HIF-1α蛋白表达较对照组无明显变化(0.92 ±0.19 vs 0.94±0.09,P＞0.05),LOX蛋白表达较对照组降低(0.35 ±0.11 vs 0.81±0.13,P＜0.05),而E-cadherin蛋白表达较对照组增高(4.65 ±0.90 vs 2.23 ±0.61,P＜0.05).结论:使ROS升高,上调HIF-1α,使LOX过表达,进而下调E-cadherin,ROS可能介导卵巢癌细胞间充质转化,继而发生侵袭转移.