miR-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨miR-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞株增殖与凋亡的调控作用。方法:收集2015年1月至2019年8月深圳市儿童医院收治肾母细胞瘤患儿新鲜的瘤组织和瘤旁肾组织30例。实验分为模拟物阴性对照组、miR-200c-3p组及miR-200c-3p抑制剂组。采用实时荧光定量PCR法检测30例配对的肾母细胞瘤肿瘤组织、瘤旁肾组织及肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞和人胚肾293FT细胞系中miR-200c-3p的表达情况。采用细胞计数盒8(CCK-8)细胞增殖实验测定miR-200c-3p抑制SK-NEP-1细胞增殖的效果，流式细胞术检测miR-200c-3p对SK-NEP-1细胞周期及凋亡的影响。裸鼠原位移植实验检测miR-200c-3p过表达对体内成瘤的影响，对瘤体组织进行HE染色并病理形态的观察、免疫组织化学染色检测移植瘤组织中核增殖指数Ki-67的增殖情况；Western blot法检测3组裸鼠移植瘤组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平。结果:30例患儿miR-200c-3p的表达水平在肾母细胞瘤组织(0.420±0.587)中明显低于配对的瘤旁肾组织(1.500±0.504)( t＝8.613， P<0.001)。miR-200c-3p的表达水平在SK-NEP-1细胞中(0.363±0.006)与人胚肾293FT细胞(0.807±0.186)比较也显著下降( t＝4.136， P<0.05)。CCK-8法表明按照组间和时间交互效应miR-200c-3p可抑制SK-NEP-1细胞体外增殖( F＝16.81， P<0.001)。流式细胞术检测肾母细胞瘤细胞周期与凋亡显示，miR-200c-3p能使SK-NEP-1细胞阻滞在G0/G1期及S期( t＝-7.770， P<0.01； t＝11.501， P<0.001)，且促进早期凋亡率增加，晚期凋亡率降低( t＝-22.270， P<0.001； t＝4.612， P<0.01)。裸鼠原位移植实验显示与模拟物阴性对照组比较，miR-200c-3p组肿瘤体积[(2.469±0.914) cm 3比(0.419±0.16) cm 3]明显缩小( t＝5.407， P<0.001)，而miR-200c-3p抑制剂组[(1.627±0.189) cm 3]差异不明显( t＝2.209， P＝0.052)。Western blot实验示miR-200c-3p上调了凋亡蛋白cleaved Caspase-3和Bax的表达水平( t＝-47.000、-82.730，均 P<0.001)，但下调了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平( t＝53.740， P<0.001)。 结论:miR-200c-3p能抑制SK-NEP-1细胞增殖及促进细胞凋亡，抑制裸鼠移植瘤的生长并起到抑癌基因的作用。