微小RNA-7对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨过表达微小RNA-7(miR-7)对肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭能力的影响及调控机制.方法 采用实时荧光定量PCR法检测肝癌组织和癌旁正常组织中miR-7 mRNA和Raf1 mRNA的表达,分析miR-7 mRNA的表达与肝癌患者临床病理特征的关系.将肝癌HepG2细胞分为空白对照组、miR-7阴性对照组和miR-7模拟物转染组,采用脂质体转染技术将miR-7模拟物和阴性对照瞬时转染HepG2细胞,以实时荧光定量PCR法检测miR-7 mRNA的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间点各组细胞的增殖活性,采用Transwell侵袭实验检测各组侵袭细胞数目.通过TargetScan在线预测miR-7作用的靶基因,采用荧光素酶报告基因实验验证miR-7对预测靶基因Raf1的3′非翻译区的靶向作用.采用Western blot法检测肝癌组织、相邻正常组织和各组细胞中Raf1蛋白的表达.采用Pearson法分析miR-7 mRNA与Raf1 mRNA表达的相关性.结果 肝癌组织和相邻正常组织中miR-7 mRNA的相对表达水平分别为0.49±0.02和1.21±0.05,差异有统计学意义(P＜0.01);miR-7 mRNA的表达水平与肿瘤大小、是否转移和预后有关(均P＜0.05).miR-7模拟物转染组HepG2细胞中miR-7 mRNA的相对表达量为12.67±0.40,明显高于空白对照组(0.49±0.01,P＜0.01).与空白对照组比较,转染48和72 h时,miR-7模拟物转染组的吸光度明显降低(P＜0.01),侵袭细胞数目明显减少(P＜0.01),野生型Raf1报告基因的荧光素酶活性明显降低(P＜0.01).肝癌组织和相邻正常组织中Raf1蛋白的相对表达量分别为3.15±0.10和0.53±0.03,差异有统计学意义(P＜0.01).miR-7阴性对照组和miR-7模拟物转染组HepG2细胞中Raf1蛋白的相对表达量分别为0.98±0.02和0.24±0.01,差异有统计学意义(P＜0.01);肝癌组织中miR-7与Raf1的表达呈负相关(P＜0.05).结论 miR-7在肝癌组织中的表达明显降低,与肝癌患者的较差预后相关;miR-7能通过调控Raf1基因的表达抑制肝癌HepG2细胞的体外增殖和侵袭能力.