β-catenin介导乳腺癌细胞多柔比星耐药实验研究

目的 多柔比星是乳腺癌最常用的一线化疗药物之一,其耐药机制至今尚未完全阐明.本研究探讨Wnt/β-catenin信号分子在乳腺癌多柔比星耐药中的作用及机制.方法 以多柔比星低剂量诱导结合间歇大剂量冲击的方法建立MCF7多柔比星耐药细胞株MCF7/ADR.MTS实验比较MCF7与MCF7/ADR细胞对多柔比星的敏感性.蛋白质印迹检测MCF7和MCF7/ADR细胞间Wnt/β-catenin蛋白的表达改变;并以双荧光素酶报告基因系统检测β-catenin的转录活性.采用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰MCF7/ADR细胞中β-catenin的表达,MTS检测多柔比星药物敏感性改变.实时定量PCR及蛋白质印迹检测β-catenin靶分子sp5、Axin2、P-gp的表达.另外,以同样的方法诱导建立乳腺癌多柔比星耐药细胞株MDA-MB231/ADR.蛋白质印迹检测β-catenin及其靶分子sp5、Axin2、P-gp的表达.siRNA干扰MDA-MB231/ADR细胞中β-catenin的表达,MTS检测MDA-MB231/ADR细胞对多柔比星药物敏感性改变.结果 诱导建立了乳腺癌多柔比星耐药细胞株MCF7/ADR.MTS细胞毒实验结果显示,MCF7/ADR细胞对多柔比星耐药132倍.蛋白质印迹结果显示,MCF7/ADR细胞中β-catenin活化,报告基因显示耐药细胞中β-catenin转录活性由6.891±0.876上调至25.873±2.054,t=13.526,P<0.01.多柔比星对β-catenin干扰组IC50值显著低于干扰组对照组和未干扰组,F=120.529,P<0.05.在MCF7/ADR细胞中P-gp mRNA及蛋白均上调,t=13.091,P<0.05;而sp5、Axin2表达差异无统计学意义,t值分别为1.792和0.836,均P>0.05.干扰β-catenin后P-gp表达被抑制(0.883±0.127 vs 0.312±0.035),t=11.351,P<0.05.同样的,诱导建立的乳腺癌多柔比星药细胞系MDA-MB231/ADR,耐药指数为68.450倍.β-catenin及其调控分子P-gp明显上调.干扰 β-catenin后MDA-MB231/ADR中P-gp表达被抑制,对多柔比星的敏感性增加,F=97.445,P<0.05.结论 β-catenin通过上调P-gp介导乳腺癌细胞对多柔比星耐药.