siRNA沉默HIF-2α基因影响人肝癌细胞株HepG2增殖与侵袭机制探讨

目的 恶性肿瘤在生长过程中会出现肿瘤内部缺氧微环境,缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)和缺氧诱导因子2α(hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)等因子能够适应细胞内缺氧微环境,并对多种基因进行调控,促进肿瘤细胞增殖、迁移侵袭以及放化疗抵抗等.本研究旨在探讨siRNA沉默HIF-2α后对人肝癌细胞株HepG2增殖、侵袭和细胞周期素D1 (Cyclin D1)表达的影响.方法 200 μmol/L氯化钴(CoCl2)诱导细胞模拟缺氧,作为低氧组,HIF-2α siRNA转染缺氧环境下HepG2细胞,分为低氧+HIF-2α siRNA组、低氧+Control siRNA组,Real-timePCR、蛋白质印迹法检测转染48 h后各组细胞中HIF-2a、Cyclin D1的mRNA和蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖,流式细胞术观察细胞周期分布,侵袭试验观察细胞侵袭能力.结果 转染特异性HIF-2α siRNA于HepG2细胞后,低氧+ HIF-2α siRNA组HIF-2α和Cyclin D1 mRNA相对表达量分别为0.557±0.082和0.352±0.049,显著低于低氧组1.127±0.069和0.740±0.068,t值分别为13.092和11.391,均P＜0.001;HIF-2α和Cyclin D1蛋白相对表达量分别为0.018±0.005和0.338±0.054,显著低于低氧组0.077±0.010和0.613±0.047,t值分别为12.728和9.411,均P＜0.001;低氧+HIF-2α siRNA组HepG2细胞在24、48、72、96和120 h的A值分别为0.335±0.045、0.485±0.080、0.631±0.063、0.772±0.055和0.651±0.080,显著低于低氧组0.512±0.061、0.726±0.054、0.836±0.072、0.867±0.077和0.785±0.063,均P＜0.001;低氧+HIF-2a siRNA组穿膜细胞数(37.83±4.920)显著低于低氧组(86.17±7.030),t=13.806,P＜0.001;合成期(S期)与合成后期(G2/M期)细胞比率分别为(21.168±2.007)％和(18.187±5.500)％,均低于低氧组(26.048±3.558)％和(27.843±3.193)％,t值分别为2.926和3.719,P值分别为0.015和0.004,G0/G1期细胞比率为(60.645±4.199)％,显著高于低氧组(46.108±4.556)％,t=5.748,P＜0.001.结论 HIF-2α基因表达水平下降可抑制HepG2细胞增殖侵袭和改变细胞周期分布,可能与下调Cyclin D1的表达有关.