RNA干扰对白血病细胞增殖与凋亡机制的探讨

目的 尾侧同源盒基因(caudal tupe homeobox gene 2,CDX2)是早期胚胎生长发育过程中重要的调节因子,近年来有研究证实CDX2基因在造血细胞增殖分化过程中亦发挥重要作用.本研究采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默白血病K562细胞中CDX2的表达,探讨该基因沉默前后对白血病细胞增殖和凋亡的影响,为白血病的临床治疗提供理论依据.方法 设计合成针对目的基因CDX2不同编码区的3个小干扰RNA序列(CDX2-siRNA-1443,CDX2-siRNA-2009,CDX2-siRNA-921)及阴性对照序列(CDX2-siRNA-NC),将各组siRNA分别转染K562细胞,同时设未转染K562细胞组作为对照,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测CDX2 mRNA和蛋白的表达量变化,筛选对目的基因CDX2沉默效率最高的siRNA序列,用于下一步实验.MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测转染前后细胞增殖和凋亡变化.结果 RT-PCR结果显示,与未转染K562细胞组相比,3组CDX2-siRNA均能有效沉默K562细胞内CDX2 mRNA表达,其中CDX2-siRNA-921对CDX2 mRNA沉默效率最高(66.2％),差别有统计学意义,P＜0.05.蛋白质印迹法结果显示,CDX2-siRNA-921组CDX2蛋白相对表达量与未转染K562细胞组相比降低最明显(68.0％,P＜0.01),该结果与RT-PCR结果相符.MTT法显示,转染CDX2-siRNA-921组细胞存活率明显低于未转染K562细胞组,而转染CDX2-siRNA-NC组细胞存活率无明显变化,提示转染CDX2-siRNA-921能够明显抑制细胞增殖.流式细胞术结果显示,与CDX2-siRNA-NC组和正常细胞组相比,转染CDX2-siRNA-921组细胞凋亡率显著增加.结论 CDX2 siRNA能够有效抑制白血病细胞K562中CDX2的表达,使细胞增殖减弱、凋亡增加,有望为白血病临床治疗提供新的基因靶点和治疗方法.