喉癌相关成纤维细胞的分离培养与鉴定

目的 对喉癌相关成纤维细胞(CAFs)及正常喉成纤维细胞(NFs)进行分离、培养、纯化并鉴定、分析其生物学特性.方法 采用组织块法和胶原酶消化法进行喉CAFs和NFs的原代培养.选择第3代喉CAFs及NFs,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,HE染色光镜下观察细胞形态,免疫荧光法、qRT-PCR法及Western-blot法分别测定喉CAFs和NFs的CK、Vimentin、FAP及α-SMA的表达.CCK-8法检测喉CAFs和NFs的增殖活性,并绘制生长曲线.结果 与喉NFs相比,喉CAFs细胞不规则,排列紊乱,且增殖活性明显增强;免疫荧光染色、qRT-PCR及western-blot检测发现,喉CAFs和NFs中CK均呈阴性表达,Vimentin、α-SMA及FAP则均呈阳性表达.结论 通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的喉CAFs以供进一步研究之用.