RNA干扰Nodal基因对胃癌细胞凋亡及血管生成的影响

目的 构建并鉴定Nodal基因的RNA慢病毒表达载体,探讨Nodal基因对胃癌及血管生成的作用.方法 针对Nodal mRNA设计siRNA,构建慢病毒质粒,测序鉴定质粒构建成功.将构建的慢病毒质粒及包装质粒共转染293T细胞,鉴定慢病毒包装成功,并测定其滴度.将慢病毒转染人胃腺癌细胞株MKN-45,通过qPCR检测Nodal基因表达.流式细胞仪检测细胞凋亡.Cellomics仪观察人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成.结果 通过测序显示,插入Nodal基因RNAi序列正确.包装后测定病毒滴度达(5.0×108)TU/ml,qPCR检测提示RNA干扰病毒转染MKN-45细胞株后,Nodal基因表达水平显著下降.干扰后胃癌细胞凋亡率明显上升(P<0.05),干扰Nodal基因对血管生成无显著影响(P>0.05).结论 成功构建了人Nodal基因的RNAi慢病毒表达系统.干扰Nodal基因显著增加胃癌细胞凋亡.