脂联素通过AMPK/mTOR/4EBP1通路对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响
China Oncology(2020)
摘要
背景与目的:脂联素(adiponectin,APN)被认为是一种强有力的抑制肿瘤细胞生长的抗癌因子,但APN调节细胞转移的作用机制尚不清楚.探讨在子宫内膜癌HEC-1B细胞中,APN能否通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/磷酸化真核启动因子4E结合蛋白1(4E binding protein 1,4EBP1)通路抑制细胞迁移及侵袭.方法:实验设计为4组:①APN组:20μg/mL APN作用于细胞30 min;②抑制剂组:10μmol/L复合物C(AMPK抑制剂)作用于细胞30 min;③APN+抑制剂组:10μmol/L复合物C预处理细胞30 min后,加入20μg/mL APN作用30 min;④对照组:仅加入无血清DMEM培养基.实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)技术检测4组细胞中B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP-9)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测4组细胞中Bcl-2、MMP-9及AMPK信号通路中AMPK、mTOR、4EBP1蛋白水平;Transwell及划痕实验检测4组HEC-1B细胞的迁移能力.结果:Bcl-2和MMP-9 mRNA的表达水平在APN组中分别为0.64±0.08和0.68±0.02,均明显低于APN+抑制剂组(分别为0.98±0.11和0.96±0.08;P=0.02和0.03).APN组中,HEC-1B细胞Bcl-2、MMP-9蛋白水平分别与对照组、抑制剂组、APN+抑制剂组比较,差异均有统计学意义(P=0.00).APN组中,HEC-1B细胞AMPK、mTOR、4EBP1蛋白水平分别为1.49±0.02、0.48±0.00、0.19±0.00.与对照组比较,蛋白水平明显升高(P=0.00).APN组穿膜细胞数为(78.72±10.74)个,APN+抑制剂组为(131.45±9.11)个,对照组为(131.91±12.29)个,APN组与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.00),APN+抑制剂组与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.12).APN组中,HEC-1B细胞迁移率为(19.27±1.14)%,与其余3组比较,4组组间差异均有统计学意义(P=0.00),其余3组组间差异无统计学意义(F=2.78,P=0.39).结论:APN可经AMPK/mTOR/4EBP1信号通路发挥抑制子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的效应,达到抗肿瘤作用.
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