RNA干扰ATG16L1抑制人胃癌细胞BGC823自噬并促进顺铂诱导的细胞凋亡

[目的]检测RNA干扰自噬相关基因16L1 (autophagy-related gene 16L1,ATG16L1)表达后胃癌细胞的自噬活性,观察在ATG16L1敲减下顺铂(DDP)对胃癌细胞凋亡的影响.[方法]用ATG16L1 siRNA技术构建ATG16L1低表达的人胃癌BGC823细胞株作为干扰组,转染阴性干扰的BGC823细胞作为阴性转染组,未转染的BGC823细胞作为对照组;Western blot检测各组细胞中ATG16L1的表达和自噬标志物微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1M1B-light chain 3,LC3)及死骨片蛋白1(sequestosome 1,P62)的表达;免疫荧光观察LC3II情况.CCK-8实验检测DDP处理后各组细胞增殖能力,计算IC50值.经DDP刺激后,流式细胞术检测细胞凋亡,再用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白表达.最后应用公共数据库Kaplan-Meier对多组胃癌患者mRNA表达谱进行分析,预测ATG16L1的表达水平对患者预后的影响.[结果]ATG16L1 siRNA干扰组较对照组蛋白表达水平明显降低(P＜0.001);LC3II水平下降(P＜0.01),P62水平上升(P＜0.01),并且LC3荧光强度下降(P＜0.05).经DDP诱导后,干扰组细胞增殖明显受抑(P＜0.001),细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);ATG16L1干扰组中促凋亡分子cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达比对照组明显增加(P＜0.001,P＜0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P＜0.001).公共数据库Kaplan-Meier表达谱芯片分析结果显示高表达ATG16L1组较低表达组预后差,差异有统计学意义(P=0.001).[结论]RNA干扰ATG16L1抑制胃癌细胞自噬,并能够明显增强顺铂诱导人胃癌细胞的凋亡,提示靶向干扰ATG16L1抑制细胞自噬后可能通过调控细胞凋亡提高胃癌细胞对化疗药物的敏感性.