USP22截短质粒构建鉴定及其在肝细胞肝癌细胞中的功能初探

目的:构建编码ubiquitin specific peptidase 22(USP22)截短蛋白的表达质粒,探索USP22在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用及其分子机制,并初步解析USP22在HCC细胞系中对细胞增殖及索拉菲尼作用的影响.方法:设计合成针对于人源 USP22 截短质粒序列的引物,通过 PCR的方法以含有USP22全长蛋白编码序列的表达载体作为模板,扩增目的片段,再用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切,连接转化后,将构建好的质粒进行酶切鉴定及测序,证明USP22 截短质粒构建成功.将构建好的USP22全长及截短表达质粒转染到HCC细胞系HCC－LM3中,分别进行Western blot和confocal实验检测USP22全长及截短质粒在HCC－LM3细胞中的表达及定位.生物学功能方面,利用MTS法检测USP22全长对HCC细胞增殖及索拉菲尼作用的影响.结果:成功构建了USP22 截短表达质粒,并在HCC细胞系HCC－LM3 中验证了其蛋白表达;USP22全长及所构建的截短质粒编码蛋白在HCC－LM3 中定位于细胞核;此外,生物学功能实验证实USP22促进HCC－LM3细胞增殖,并削弱了索拉菲尼对HCC－LM3细胞生长的抑制作用.结论:在HCC－LM3细胞中,USP22及其截短质粒编码蛋白均定位于细胞核;USP22 促进HCC细胞增殖,且可能参与在HCC治疗中的索拉菲尼耐受进程.