构建稳定表达病毒相关RNA的真核细胞株及其对抗肿瘤免疫促凋亡分子的影响

目的:构建稳定表达病毒相关RNA (virus-associated RNA, VA RNA) 的293F-VA细胞株, 并探讨其对靶向HER2阳性肿瘤的免疫促凋亡分子表达水平的影响.方法:采用PCR方法, 扩增含VA RNA的功能序列, 克隆入Piggy Bac转座系统质粒, 将VA RNA编码序列转入293F细胞中, 经过抗性筛选和流式细胞仪鉴定, 得到293F-VA细胞株.将萤光素酶、红色荧光蛋白及免疫促凋亡分子编码质粒分别转入293F-VA细胞株或亲本293F细胞株, 通过萤光素酶活力检测和Western Blot实验, 比较两种细胞株对外源目的蛋白表达水平的影响.结果:成功构建了Piggy Bac-VA质粒.共转染Piggy Bac-VA质粒可以明显提高细胞内Fluc蛋白的表达水平 (P <0. 05) .VA RNA编码序列通过Piggy Bac转座系统转入293F细胞中, 获得293F-VA细胞株.与293F亲本细胞相比, 293F-VA细胞株将萤火虫萤光素酶Fluc蛋白的表达水平提高363. 9％ (P<0. 05) ;对海肾萤光素酶Rluc蛋白及红色荧光蛋白m Cherry的表达均表现出3倍左右的提高 (P <0. 05) .293F-VA细胞株不仅能够提高免疫促凋亡分子e23-Fc-Fdt-t Bid在细胞内的表达水平, 并且显著增加目的蛋白向细胞外分泌的水平, 较293F亲本细胞提高4. 2倍 (P <0. 05) .结论:建立了稳定表达VA RNA的细胞株293F-VA, 该细胞株能够显著提高抗肿瘤免疫促凋亡分子的表达水平.