MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立

目的:构建迁移诱导基因(migration inducing gene 7,MIG7)的逆转录病毒表达载体并测序,初步建立其包装细胞株.方法:根据MIG7已知序列设计合成所需脱氧寡核苷酸序列,并与线性RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体连接.PCR扩增热转化后的连接产物,检测和挑取阳性克隆和阳性菌落,提取质粒后测序,与Gen-Bank中特异性MIG7-shRNA基因序列对比.包装并获取MIG7-shRNA重组逆转录病毒,qRT-PCR测定MIG7-shRNA重组逆转录病毒滴度并转染MHCC-97H细胞株.结果:构建的MIG7-shRNA表达载体与设计的完全一致,成功获得MIG7-shRNA逆转录病毒表达载体质粒CTC698-1-1和CTC698-2N-1转染的PT67细胞克隆株,pSIREN-M1病毒和pSIREN-MN病毒颗粒数约为1.0×108v.p/ml,能高效转染MHCC-97H细胞株.结论:成功构建了MIG7的逆转录病毒表达载体并建立其包装细胞株.