miR-132靶向作用SOX4/E-cadherin信号通路逆转PC-9细胞株吉非替尼耐药性的实验研究
Chinese Clinical Oncology(2019)
Abstract
目的 探讨miR-132靶向SOX4/E-cadherin信号通路对PC-9吉非替尼耐药细胞株增殖、迁移和凋亡的影响.方法 采用吉非替尼长期浓度梯度递增法体外建立PC-9/GR耐药细胞株,MTT法验证其耐药性.将miR-132模拟物(mimics)或空质粒转染至PC-9/GR细胞作为miR-132组和NC组,另设未处理PC-9/GR作为空白对照组.采用MTT法、An-nexin V/PI双染法、划痕实验检测吉非替尼对各组细胞增殖、凋亡和迁移的影响.采用实时荧光定量PCR (QPCR)检测miR-132和SOX4的表达水平.采用双荧光素酶报告实验验证SOX4与miR-132的靶向关系.将miR-132组PC-9/GR细胞分别转染过表达SOX4质粒和空质粒为miR-132+SOX4组和miR-132-NC组,采用Western blotting检测E-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平.结果 体外成功建立PC-9/GR耐药细胞株,不同浓度吉非替尼对PC-9/GR细胞增殖抑制率低于PC-9细胞.PC-9和PC-9/GR的IC50分别为157.7 nmol/L和917.9 nmol/L.PC-9/GR的耐药指数(RI)为5.82.PC-9/GR细胞miR-132表达水平明显低于PC-9细胞(P<0.05),转染miR-132 mimics后,miR-132组miR-132表达水平明显高于PC-9/GR组和NC组(P<0.05).不同浓度吉非替尼对miR-132组的增殖抑制率高于PC-9/GR组和NC组(P<0.05).miR-132组IC50为357.6 nmol/L.357.6 nmol/L吉非替尼作用于miR-132组24h后,细胞早期凋亡率和细胞愈合率分别为(23.14±2.23)%、(13.44±1.81)%,与PC-9/GR组和NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).双荧光素酶报告实验验证SOX4可能是miR-132的下游靶基因.miR-132组PC-9/GR细胞SOX4 mRNA表达水平低于PC-9/GR组和NC组(P<0.05).miR-132+SOX4组SOX4和Vimentin蛋白表达水平高于miR-132组和miR-132-NC组(P<0.05);而E-cadherin则相反(P<0.05).结论 上调miR-132可抑制SOX4水平进而诱导EMT发生,从而逆转PC-9/GR细胞株对吉非替尼的耐药.
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