UBE2C调控前列腺癌干细胞样细胞自我更新能力的作用研究?

探讨泛素偶联酶2C(UBE2C)在前列腺癌干细胞样细胞维持自我更新能力中的调节作用.方法 采用磁激活细胞分选测定前列腺癌DU145和C4?2B细胞株中CD44+细胞比例;在DU145?CD44+及C4?2B?CD44+细胞株中转染si?UBE2C1#、si?UBE2C2#和si?UBE2C3#序列,并设转染阴性序列的对照组;采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测3条序列的敲减效率;Western blotting检测转染后 UBE2C蛋白的表达水平;QPCR检测细胞干细胞特性相关基因(KLF4、SOX2、Oct4、Myc、NANOG、ABCG2、CTNNB1、UBE2C、ACTB)的表达水平,倍比稀释成球实验检测肿瘤干细胞的成球能力和成球频率,CCK8细胞增殖实验检测肿瘤干细胞对多西他赛的敏感性.结果 磁激活细胞分选测定显示,前列腺癌C4?2B和DU145细胞株分选后CD44+细胞比例分别为90. 3%和98. 3%. QPCR检测显示,在3条si?UBE2C序列转染后,UBE2C的表达水平与对照组比较均显著下降(P＜0. 01),其中si?UBE2C1#和si?UBE2C2#的敲减效率最高,用于后续干细胞特性相关实验. Western blotting检测显示,转染后 DU145?CD44+和 C4?2B?CD44+细胞株中 UBE2C 蛋白的表达水平显著降低(P＜0. 01). QPCR 检测显示,敲减UBE2C的表达能够显著抑制前列腺癌CD44+干细胞样细胞中干性相关基因Oct4、Myc、NANOG、ABCG2、CTNNB1、UBE2C和ACTB的表达.倍比稀释成球实验显示,在C4?2B?CD44+和DU145?CD44+细胞株中敲减UBE2C表达后,第一代和第二代前列腺癌干细胞样细胞的成球数量显著下降,同时前列腺癌干细胞样细胞的成球频率亦显著下降( P＜0. 05). CCK8实验显示,敲减UBE2C表达后,C4?2B?CD44+细胞株中对照组、si?UBE2C1#组和si?UBE2C2#组多西他赛的IC50分别为42. 3、7. 5和3. 6 nmol／L,DU145?CD44+细胞株中对照组、si?UBE2C1#组和si?UBE2C2#组多西他赛的IC50分别为56. 2、11. 2和5. 0 nmol／L.结论UBE2C在前列腺癌CD44+干细胞样细胞维持干细胞特性中发挥重要作用,有望成为抑制前列腺癌干细胞样细胞的治疗靶点.