三阴乳腺癌细胞中Atg13基因的过表达与化疗耐药的研究

目的 探讨自噬相关基因13(Atg13)与三阴性乳腺癌的化疗耐药之间的关系.方法 间歇刺激法构建对阿霉素耐受的MDA-MB-231 TNBC细胞株(命名为MDA-MB-231/Dox),并采用药物敏感实验和细胞凋亡实验(TUNEL染色)对耐药细胞株MDA-MB-231/Dox的耐药表型进行鉴定;蛋白免疫印迹实验检测敏感细胞MDA-MB-231和耐药细胞MDA-MB-231/Dox中的自噬相关蛋白LC3A、LC3B的表达情况,免疫荧光法测定细胞内的LC3B荧光斑点数;脂质体转染重组干扰质粒sh-Atg13至耐药细胞MDA-MB-231/Dox中,并经嘌呤霉素筛选得到稳转细胞(命名为MDA-MB-231/Dox+sh-Atg13),蛋白免疫印迹实验检测稳转细胞MDA-MB-231/Dox+ sh-Atg13及空载体对照细胞MDA-MB-231/Dox+ control plasmid中的Atg13蛋白表达水平,同时检测细胞内的自噬水平(自噬相关蛋白LC3A、LC3B的表达量及LC3B荧光斑点数)及各组细胞对Dox的药物敏感性.结果 成功构建对Dox耐药的TNBC细胞株MDA-MB-231/Dox,并且发现耐药细胞中的基础自噬水平显著高于亲本细胞MDA-MB-231(P＜0.05).重组干扰质粒sh-Atg13抑制Atg13基因表达后,使得耐药细胞MDA-MB-231/Dox中的自噬体标志分子LC3B蛋白表达量显著降低(P＜0.05),且耐药细胞对Dox的药物敏感性增加(IC50值显著降低,P＜0.05).结论 在TNBC细胞MDA-MB-231中,Atg13参与了细胞对Dox获得性耐药的产生.