骨髓间充质干细胞源外泌体miR-21-5p通过下调PHLPP2促进前列腺癌PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源的外泌体对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:采用qPCR检测miR-21-5p在前列腺癌细胞系中的表达水平.采用电子显微镜观察BMSC分离出的外泌体形态,Western blotting检测外泌体表面标志物的表达以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-21-5p和同源血小板富亮氨酸复重蛋白磷酸酶2 (PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase 2,PHLPP2)的靶向调控关系.向PC-3细胞培养液中加入10μl的BMSC外泌体悬液(Exo组)、转染sh-PHLPP2或antagomiR,CCK-8和Transwell实验检测PC-3细胞增殖和迁移能力.结果:miR-21-5p在前列腺癌PC-3细胞系中高表达.成功分离BMSC培养液上清中的外泌体,透射电子显微镜下观察到外泌体典型的囊泡状结构,且表达CD9、CD63和CD81等特异性蛋白.Exo组中PC-3细胞的增殖、侵袭[(421.34±22.45)vs (200.09+14.22)个,P＜0.05]、迁移能力和N-cadherin、Vimentin和miR-21-5p的表达水平均显著高于对照组(均P＜0.05).证实PHLPP2是miR-21-5p的靶基因.与对照组相比,Exo组和sh-PHLPP2组PC-3细胞中PHLPP2的表达明显降低(0.66±0.09、0.42±0.05 vs 1.09±0.08,均P＜0.01),细胞增殖、侵袭和迁移[(87.23±12.67)％、(82.45±10.13)％vs(66.46±9.13)％]能力均显著提高(均P＜0.01),E-cadherin表达水平显著降低而N-cadherin和Vimentin表达水平显著升高(均P＜0.05).结论:miR-21-5p在前列腺癌PC-3细胞系中高表达,BMSC外泌体miR-21-5p通过靶向下调PHLPP2提高PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力.