嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的体外构建、扩增及初步功能鉴定

目的:探索一种特异性靶向CD19分子的嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的构建方法,并明确其体外杀伤靶细胞的效果.方法:运用分子克隆技术,将PCR获得的CD19-CAR片段构建到pCDH-GFP慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒转染供者CD3+T细胞,通过流式细胞术及PCR鉴定转染效率,并通过7-AAD染色鉴定扩增得到的CD19-CAR-T细胞体外杀伤CD19+ Ramos靶细胞的效果.结果:经慢病毒转染T细胞在体外培养10 d后,CD3+T扩增达(78.8±23.2)倍,(58.3±5.4)％的CD3+T细胞表达GFP,CD19-CAR-T体外杀伤CD19+ Ramos靶细胞在效靶比5∶1时效率为(57.4±9.3)％.结论:本实验成功建立了一种有效的体外构建及扩增CD19-CAR-T的方法,且具有明显靶向性,为CD19+B细胞肿瘤临床治疗提供实验依据.