顺铂耐药乳腺癌细胞株的建立及FANCF基因在耐药中的作用

目的:探讨三阴性乳腺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞和敏感细胞中FA/BRCA通路关键基因FANCF的表达和功能,以及与DDP耐药的相关性.方法:DDP浓度递增法诱导建立乳腺癌细胞MDA-MB-231的DDP耐药细胞株MDA-MB-231/DDP;通过RNAi技术敲减MDA-MB-231敏感细胞和DDP耐药细胞中FANCF,并在mRNA和蛋白水平进行敲减效果验证.CCK-8法检测DDP耐药细胞株增殖活性,Western blotting法检测该细胞中FANCF蛋白表达,流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期和凋亡情况,实时定量PCR(RT-qPCR)法检测FANCF mRNA的表达.结果:MDA-MB-231细胞DDP诱导3个月建立的MDA-MB-231/DDP细胞株耐药指数为13.5,其G0/G1期细胞增多、S期和G2/M期细胞减少.MDA-MB-231/DDP细胞中FANCF mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P＜0.01).FANCF敲低后MDA-MB-231/DDP细胞凋亡增加,细胞对DDP的药物敏感性显著升高(均P＜0.01).结论:FANCF基因通过抗凋亡作用导致MDA-MB-231细胞对DDP的耐药性,FANCF是乳腺癌治疗的一个潜在靶点.