桥接整合因子1通过AKT-mTOR通路诱导非小细胞肺癌H1975细胞周期阻滞

目的:研究桥接整合因子1(bridging intergrator 1,Bin1)基因过表达后对非小细胞肺癌细胞株H1975细胞周期的影响及其作用机制.方法:构建携带Bin1基因的CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-Bin1质粒,并转染H1975细胞(Bin1+组),另设置空白质粒转染组(Bin1-组)及空白对照组(Ctrl组),利用RT-PCR和Western blotting分别检测3组细胞中Bin1在mRNA和蛋白质水平的表达情况.流式细胞术检测不同处理组H1975细胞周期的变化,Western bohting分别检测各组中AKT、mTOR磷酸化水平及细胞周期相关蛋白(周期蛋白D1、CDK4、Rb)的表达情况.结果:与Bin1-组、Ctrl组比较,Bin1+组H1975细胞中Bin1在mRNA、蛋白水平表达明显上调(均P＜0.05);H1975细胞阻滞在G1期[(60.53±1.89)％vs(46.14±1.56)％、(47.33±2.07)％,均P＜0.05];Bin1+组H1975细胞内p-AKT、p-mTOR表达下调(均P＜0.05),AKT、mTOR表达变化无统计学差异(P＞0.05);周期蛋白D1、CDK4的表达量均明显下调(P＜0.05),Rb表达量明显增加(P＜0.05).结论:Bin1基因在H1975细胞株过表达后明显诱导细胞周期阻滞,其机制可能是通过抑制AKT-mTOR通路及其细胞周期相关蛋白实现的.