不同方式负载AFP抗原的DC诱导抗肝癌HepG2细胞免疫效应的比较

目的:比较AFP抗原以不同方式负载DCs对后者生物学功能的影响及体外刺激CTL对肝癌HepG2细胞的杀伤作用.方法:分离健康供者外周血单个核细胞培养DC,分别用(A)人工合成AFP抗原肽、(B)HepG2细胞裂解物、(C)HepG2细胞分泌的外泌体(tumor exosome,T-exo)、(D)AFP抗原的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus express-ingα-fetoprotein antigen,rAAV/AFP)致敏DC前体细胞及(E)未负载抗原的DC作为对照,经GM-CSF、IL-4及LPS联合诱导DCs分化成熟.流式细胞术检测rAAV/AFP病毒感染效率、各组DCs表型及其刺激初始T细胞的增殖效应,7-ADD/CFSE双染法流式细胞术检测各组DCs诱导CTL对AFP阳性HepG2细胞的杀伤作用.结果:几种抗原负载方式均可诱导DCs成熟、促进CTL增殖及特异性识别并杀伤HepG2细胞,但rAAV/AFP感染DCs后,其CD83、CD86、ICAM-1、CD58、CD40分子表达水平明显高于对照组(P＜0.05),rAAV/AFP+ DC组和HepG2-Texo+ DC组对HepG2细胞的杀伤作用均分别显著优于其他抗原负载(AFP/peptide+ DC、HepG2 lysate+ DC)组[(44.92±4.12)％vs(28.42±3.29)％、(24.28±1.79)％;(41.40±2.87)％ vs(28.42±3.29)％、(24.28±1.79)％;均P＜0.05)].结论:rAAV/AFP高效感染DCs后能有效刺激初始T细胞增殖,并增强CTL对AFP阳性靶细胞的杀伤活性,而负载Texo的DCs也能诱导显著的抗肝癌效应,上述结果为基于DCs的肝癌疫苗的研发提供新的思路.