黏着斑激酶在HUVEC的增殖、迁移、凋亡和毛细血管样结构形成中的作用

目的:探讨以黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)特异性抑制剂TAE226处理或siRNA沉默FAK基因对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的增殖、迁移、细胞凋亡及毛细血管样结构形成的影响.方法:应用Real-time PCR检测HUVEC和胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)细胞株Y-MESO-14、NCI-H290中FAK mRNA的表达.以FAK siRNA转染HUVEC细胞致FAK基因沉默或以TAE226处理,采用Western blotting法检测经/未经VEGF预处理的HUVEC中FAK蛋白的表达;采用MTT法检测TAE226或FAK siRNA处理对HUVEC增殖能力的影响,Annexin-V FITC/PI双染色流式细胞术检测两者对HUVEC细胞凋亡的作用,Transwell法检测TAE226及siRNA处理对HUVEC细胞迁移的影响,体外脉管生成实验检测HUVEC中毛细血管样结构形成的数量.结果:在HUVEC中FAK mRNA的表达量显著高于Y-MESO-14和NCI-H290细胞[(0.032±0.006)vs(0.014±0.001)、(0.006 ±0.002),均P＜0.05].HUVEC在VEGF刺激下,FAK和pFAK的表达量均有增高(P＜0.05),FAK siRNA转染可以抑制VEGF预刺激下的FAK蛋白表达[(0.011 ±0.002) vs (0.036±0.004),P＜0.01].分别给予不同浓度TAE226或FAK siRNA处理,均可呈浓度依赖性地抑制HUVEC增殖、迁移和凋亡(P＜0.01).体外脉管生成实验发现,VEGF可促进HUVEC中毛细血管样结构的生成,TAE226[(14.32±7.83) vs (46.31±39.46)条,P＜0.01]而FAK siRNA[(11.83±6.75) vs (42.86±27.63)、(48.32±18.19)条,均P＜0.01]转染可明显抑制毛细血管样结构形成.结论:TAE 226处理或FAK siRNA转染可以抑制HUVEC增殖、迁移和诱导细胞凋亡,同时可显著抑制毛细血管样结构的形成,提示FAK可能成为靶向治疗恶性肿瘤的潜在靶点.