5HRE增强子和hTERT启动子联合调控CDX2基因对人结肠癌细胞系LoVo增殖的抑制

目的:检测已构建的缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)和人端粒酶催化亚单位(human telomerasere-verse transcriptase,hTERT)启动子调控CDX2基因表达的载体pLVX-5 HRE-hTERTp-CDX2-3 FLAG(5 HhC)对人结肠癌细胞系LoVo增殖的影响.方法:复苏前期筛选的转染pLVX-hTERTp-CDX2-3 FLAG(hC)的LoVo细胞(hC/LoVo)、转染pLVX-5HRE-hTERTp-3 FLAG(5 Hh)的LoVo细胞(5Hh/LoVo)、转染pLVX-5 HRE-hTERTp-CDX2-3 FLAG(5 HhC)的LoVo细胞(5HhC/LoVo)及空白LoVo细胞,各组细胞均在常氧条件和缺氧条件(加入缺氧模拟剂CoGl2)展开实验.MTT检测细胞增殖情况,平板克隆实验观察细胞集落形成,流式细胞术分析细胞周期.结果:成功复苏转染5HhC的LoVo细胞及各组对照LoVo细胞.hC/LoVo、5HhC/LoVo细胞增殖显著低于LoVo及5Hh/LoVo,且缺氧微环境下的5HhC对于LoVo细胞的增殖速度抑制更为明显[细胞增殖率,第5天,常氧vs缺氧:(48.62±3.32)％vs (36.81±2.83)％,P＜0.05;第7天,常氧vs缺氧:(56.44±2.28)％vs(38.51±3.21)％,P＜0.05].hC/LoVo、5HhC/LoVo组的平板克隆数显著低于LoVo及5Hh/LoVo组,且缺氧微环境下的5HhC对LoVo细胞集落形成能力的抑制较常氧环境下更为显著[集落数:(44.2±3.5)个vs (90.8 ±9.3)个,P＜0.05];hC/LoVo、5HhC/LoVo组G1期细胞比例较LoVo细胞及5Hh/LoVo组明显提高[(63.59±0.55)％、(64.82±2.22)％ vs (51.38±0.70)％、(51.59±0.38)％,P＜0.05],且在缺氧微环境下,5HhC/LoVo组G1期细胞比例提高更加显著[(71.38±3.02)％vs(64.82±2.22)％,P＜0.05].结论:治疗载体5HhC可使人结肠癌细胞系LoVo发生G1期阻滞,增殖及集落形成能力受到抑制,且在缺氧诱导下5HhC的抑制能力更为显著.