K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果

目的:评价新建立的K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果.方法:采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血PBMC并分离NK细胞,采用前期构建的K562工程细胞(将IL-15、4-1BBL和IL-18在白血病K562细胞上进行跨膜表达获取)联合IL-2培养方案对NK细胞进行扩增和活化,以流式细胞术检测NK细胞的扩增效果和NK细胞表面受体表达水平,CCK-8法检测扩增后NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性和ADCC活性,CCK-8法检测在培养方案扩增末期加入TKD多肽对NK细胞的活化效果.结果:对于健康志愿者的NK细胞,新建立扩增培养方案可使NK细胞在PBMC中的比例提高至(93±3)％;使NK细胞中活化性受体NKG2D、CD94、NKp30、NKp44和NKp46的比例分别提高60％、40％、20％、40％和63％,而抑制性受体的表达变化不大;扩增后NK细胞对白血病细胞K562、肺癌细胞A549、肝癌细胞SMMU-7721和乳腺癌细胞MCF-7的杀伤活性分别提高了19％、29％、26％和28％,其ADCC活性从(33±5.6)％上升至(65 ±12)％;方案中增加TKD可使NK细胞的杀伤活性从(86±4)％提高至(96±2)％.对于肿瘤患者的NK细胞,新扩增方案使其在PBMC的比例提高至(90.0±8.0)％,其对K562细胞的杀伤活性提高了17％左右.结论:K562工程细胞联合IL-2扩增方案可高效扩增NK细胞,明显激活其杀伤活性,扩增和活化的NK细胞可满足临床治疗的需要.