大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因系统的体外杀瘤研究

在肿瘤自杀基因的研究中，基因转染效率低下以及旁杀伤效果差，是人们面临的两个主要难题。大肠杆菌DeoD基因产物(嘌呤核苷磷酸化酶PNP)与哺乳动物嘌呤核苷磷酸化酶的区别在于它们的底物专一性不同，它能催化几种无毒的脱氧腺苷类似物转化为剧毒的腺嘌呤类似物。研究发现[1]，用大肠杆菌PNP基因的真核表达载体转染人结肠癌细胞系，虽转染效率不到1％，当给予前体药6-甲基嘌呤-2＇-脱氧核糖核苷(6-MPDR，脱氧腺苷类似物，为大肠杆菌PNP的底物)后，则导致几乎所有周围细胞的死亡。这些结果表明，PNP／6-MPDR已经成为一个新型的自杀基因系统，而且它的旁杀伤作用是其它自杀基因系统无可比拟的，这就极大地弥补了转染率低下的不足。本文在构建了自杀基因载体pcDNA3-PNP的基础上[2]，进一步在体外证实了PNP／6-MPDR自杀基因系统的功能，为以后研究PNP／6-MPDR自杀基因系统在肿瘤基因治疗中的应用打下了基础。1 材料与方法1．1 材料1．1．1 菌株及质粒E．coli Top10；自杀基因载体pcD-NA3-PNP，本实验室构建[2]。