微RNA-374c-5p通过靶向LIMK1增强人乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的:探讨人类(Homo sapiens,hsa)-微RNA(microRNA,miR)-374c-5p对人乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌MCF-10A、MDA-MB-231和MDA-MB-231/DDP细胞中hsa-miR-374c-5p和Lim结构域激酶1(Lim domain kinase 1,LIMK1)的表达情况.将hsa-miR-374c-5p模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)以及LIMK1 siRNA和过表达质粒分别转染乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞,采用实时荧光定量PCR法检测hsa-miR-374c-5p和LIMK1 mRNA表达变化,蛋白质印迹法检测LIMK1蛋白表达水平;分别采用CCK-8、FCM和平板克隆形成实验检测细胞增殖、凋亡和克隆形成能力的变化;荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-374c-5p与LIMK1的结合关系.结果:乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞中hsa-miR-374c-5p和LIMK1的表达趋势相反.过表达hsa-miR-374c-5p或敲低LIMK1表达均可抑制MDA-MB-231/DDP细胞的增殖活力(P值均＜0.05)和克隆形成能力(P值均＜ 0.05),而细胞凋亡率明显升高(P值均＜0.05),对顺铂的敏感性明显增强(P值均＜0.05);沉默hsa-miR-374c-5p后,情况相反(P值均＜0.05);且在转染了hsa-miR-374c-5p mimics的细胞中过表达LIMK1可以逆转单一过表达hsa-miR-374c-5p引起的细胞表型改变(P值均＜0.05).hsa-miR-374c-5p可靶向调控LIMK1的表达.结论:Hsa-miR-374c-5p可以通过靶向调控LIMK1的表达,增强人乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的敏感性.