葫芦素B抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和侵袭并促进其凋亡

目的:研究葫芦素B (cucurbitacin B,CuB)对骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用不同浓度的CuB处理143B细胞,结晶紫染色和克隆形成实验检测细胞的增殖能力;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力;FCM法检测细胞周期及凋亡率的变化.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测143B细胞中上皮-间质转化相关标志物基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)以及Snail mRNA 和蛋白的表达水平;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白剪切型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved-polyadenosine diphosphate ribose polymerase,cleaved-PARP)、剪切型caspase 3(cleaved-caspase 3)和Bad以及细胞周期相关蛋白cyclin B1的表达水平;以及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)信号通路中Akt、磷酸化Akt (phospho-Akt,p-Akt)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化PTEN (phospho-PTEN,p-PTEN)蛋白的表达水平.结果:与空白对照组相比,用不同浓度的CuB处理后,143B细胞的增殖和侵袭能力受到不同程度的抑制(P值均＜ 0.05);30和40 nmol/L CuB浓度组中,细胞的凋亡率明显增加(P值均＜ 0.01),细胞周期被阻滞在G2/M期(P值均＜ 0.01).上皮-间质转化相关标志物MMP-9、Vimentin以及Snail mRNA和蛋白表达水平下调(P值均＜0.05);凋亡相关蛋白Bad、cleaved-caspase 3和cleaved-PARP的表达上调(P值均＜0.05),细胞周期相关蛋白cyclin B1的表达水平明显下调(P值均＜0.01);143B细胞中p-Akt蛋白的表达水平降低(P值均＜ 0.05),且伴有p-PTEN蛋白的表达水平增高(P值均＜ 0.05).结论:CuB能抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡;这一作用可能与CuB抑制143B细胞中Akt信号通路的活性及上皮-间质转化的发生有关.