慢病毒介导的靶向干扰PARP-1基因乳腺癌稳定细胞株的构建

目的 构建慢病毒介导的人PA RP-1基因短发夹RNA(shRNA)载体,并建立PA RP-1基因稳定干扰的MDA-MB-231乳腺癌细胞株.方法 根据GenBank提供的PARP-1 cDNA序列,构建靶向PARP-1基因慢病毒载体,将慢病毒载体与病毒包装辅助质粒共同转染293T细胞,产生重组慢病毒并进行滴度测定.将重组慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株(PARP-1组),同时设立阴性对照组和空白对照组.采用实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞PARP-1基因mRNA及蛋白的表达.结果 成功构建了人PARP-1-RNAi重组慢病毒并转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞株.空白对照组、阴性对照组和PARP-1组的PARP-1 mRNA相对表达量分别为1.001±0.056、1.022±0.021和0.166±0.041;PARP-1蛋白的相对表达量分别为0.963±0.006、0.943±0.008和0.573±0.011;与空白对照组和阴性对照组相比,PARP-1组PARP-1mRNA和蛋白的表达均显著降低(P＜0.05).结论 成功构建了PARP-1基因稳定干扰的乳腺癌MDA-MB-231细胞株.