肝细胞癌合并门静脉癌栓细胞的分离、培养及其特征的研究

目的 分别选取肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)合并门静脉癌栓(portal vein tumor thrombus,PVTT)和HCC无PVTT的原发灶组织进行原代细胞分离、培养,并将培养稳定的细胞继续体外培养并行体外实验,初步对同一患者的HCC有无PVTT的特征进行研究.方法 取人HCC合并PVTT和HCC无PVTT的新鲜手术组织标本,利用酶消化法进行肿瘤细胞原代短暂培养并稳定传代.将得到稳定培养的细胞分为HCC无PVTT细胞组、HCC合并PVTT细胞组和PVTT细胞组,分别简称为HCC-PVTT(-)细胞组、HCC-PVTT(+)细胞组和PVTT细胞组.以流式细胞术检测仪检测CD90+细胞含量,采用qRT-PCR、Western blot法检测细胞培养后的HCC干细胞相关基因及其蛋白的表达.用Transwell小室检测细胞的侵袭性.结果 成功培养出原代的HCC细胞和原代PVTT细胞,并可稳定地传代.细胞表面标志物的干细胞含量、干细胞相关基因及其蛋白表达量及侵袭性均表现为PVTT细胞组＞HCC-PVTT(+)细胞组,HCC-PVTT(+)细胞组＞HCC-PVTT(-)细胞组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 HCC及PVTT组织中均存在CD90+肝癌干细胞,干细胞干性越强的原发灶具有更强的侵袭和转移能力.