体内外方法检测化妆品用防腐剂的致敏性

目的:采用豚鼠局部封闭涂皮试验和体外人细胞系活化试验检测两种常用化妆品防腐剂的皮肤致敏性,探讨两种方法组合用于检测皮肤致敏性的可行性.方法:豚鼠局部封闭涂皮试验参照化妆品安全技术规范(2015年版)的内容进行,试验设羟苯乙酯组、羟苯丁酯组,同时设甘油为阴性对照组、2,4-二硝基氯苯(DNCB)为阳性对照组,观察试验动物皮肤反应,通过积分评价皮肤致敏性.体外人细胞系活化试验参照经济合作与发展组织(OECD)毒理学测试中的442(E)方法,试验中设羟苯乙酯组、羟苯丁酯组,阴性对照组受试物为甘油、阳性对照组受试物为DNCB,采用CCK-8法测试细胞毒性,计算细胞存活率为75％时的暴露浓度(CV75)值,流式细胞术检测各试验组物质的CD86和CD54的相对荧光强度(RFI)值.结果:豚鼠局部封闭涂皮试验检测结果显示甘油为非致敏物,DNCB为强致敏物,羟苯乙酯为非致敏物,羟苯丁酯为中度致敏物.体外人细胞系活化试验检测结果显示羟苯乙酯的CV75值为126μg/mL,RFICD86为110％～140％,RFICD54为140％～260％;羟苯丁酯的CV75值为18μg/mL,RFICD86为75％～200％,RFICD54为90％～210％;甘油的CV75值大于5000μg/mL,RFICD86为75％～100％,RFICD54为60％～140％;阳性对照物质DNCB的CV75值为2.5μg/mL,RFICD86为185％～640％,RFICD54为100％～460％.由检测结果可见羟苯乙酯、羟苯丁酯在本试验中分别被判为弱致敏物和强致敏物,DNCB为极强致敏物,甘油为非致敏物.结论:在该对比试验中,体外人细胞系活化试验较局部封闭涂皮试验检测灵敏度更高,但也存在假阳性的可能,可以考虑用体外细胞方法作为筛选方法,结合动物体内试验方法或更多的体外组合试验进一步确定.