2种方法测定氧化铜纳米颗粒对新生大鼠脑微血管内皮细胞毒性的比较研究

目的:比较实时细胞分析技术(RTCA)和刃天青法测定氧化铜纳米颗粒(CuO-NPs)对新生大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的细胞毒性的异同.方法:采用RTCA法确定BMECs细胞毒性实验的最佳细胞接种数量及染毒时间.分别用1.5、0.75、0.38、0.19、0.09 mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs,以无细胞的培养液为对照组(0 mg/mL),分别以RTCA法及刃天青法比较其细胞毒性.通过比较2种方法所获得的IC50值判断2种毒性测试方法的相关性.结果:每孔2.5×103个细胞为BMECs最佳接种浓度,接种后40 h为最佳染毒时间.RTCA检测结果表明1.5、0.75 mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs后约2 h开始细胞活性降低,并在染毒4 h内全部死亡.通过刃天青法分别在染毒3、12、24、36、48 h进行测定,得到与RTCA相似的结果,即1.5和0.75 mg/mL组的细胞毒性最大,且CuO-NPs对BMECs的细胞毒性呈剂量依赖性趋势.相关性分析结果显示2种方法所获得IC50值相关系数为0.999,P=0.000,具相关性.配对t检验结果显示,差异无统计学意义(t=1.125,P=0.323).从计算IC50的R2值来看,RTCA拟合曲线法R2值高于刃天青法R2值.结论:CuO-NPs体外作用于BMECs具有剂量依赖性的细胞毒性,RTCA方法与刃天青法测定BMECs细胞毒性结果具有相关性,RTCA方法所得结果可能更为准确,更适合于CuO-NPs的细胞毒性研究.