变异型EBER2通过抑制PKR通路增强鼻咽癌细胞抗凋亡能力

目的:前期研究发现变异型EB病毒编码小RNA 2(EBER2)基因EB-8m可能与鼻咽癌(NPC)相关,本研究旨在探讨变异型EBER2是否通过增强对RNA激活蛋白激酶(PKR)的抑制作用从而提高NPC细胞的抗凋亡能力.方法:以野生型和EB-8m变异型EBER2基因稳定转染的EB病毒阴性NPC细胞系HONE1和CNE1为研究对象,以未转染EBER2基因细胞为对照,分别用10 000 IU/mLα-干扰素(IFN-α)和2μg/mL顺铂诱导凋亡后以流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测IFN-α诱导凋亡细胞中PKR及下游eIF2α和c-Jun的磷酸化蛋白及Bcl-2蛋白表达水平.对EBER2基因转染细胞进行RNA和PKR蛋白免疫共沉淀,检测共沉淀产物中EBER2富集倍数.结果:EBER2基因转染细胞的凋亡率低于未转染EBER2基因细胞(P＜0.05或P＜0.01),且变异型的细胞凋亡率低于野生型(P＜0.05).与未转染EBER2基因细胞比较,EBER2转染细胞中磷酸化PKR、eIF2α和c-Jun减少,Bcl-2表达升高,且磷酸化PKR在变异型转染HONE1和CNE1细胞中的水平低于野生型转染细胞,磷酸化eIF2 α在变异型转染HONE1细胞中的水平亦低于野生型转染细胞,差异均有统计学意义(P均＜0.05).EBER2基因转染细胞RNA和PKR免疫共沉淀产物中可检测到EBER2,且变异型的富集倍数高于野生型(P＜0.05).结论:EB-8m变异型EBER2可能增强EBER2对PKR的结合作用,同时抑制eIF2α和c-Jun磷酸化并上调Bcl-2表达,进而增强NPC细胞抗凋亡能力.