HPV16编码蛋白与宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2表达的关系

目的:研究人乳头瘤病毒16(HPV16)编码蛋白的表达与宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2基因表达水平的关系,探讨依赖于HPV感染的宫颈癌发病机制.方法:设计与合成HPV16编码基因E6和E7序列特异性短发夹RNA(shRNA)寡聚核苷酸片段,构建表达shRNA的pRNAi载体,其中携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,以此感染HPV16阳性的SiHa宫颈癌细胞,采用荧光成像和实时荧光定量PCR(qPCR)分析等方法,评价载体转染效率、抑制效率及候选基因转录表达水平的变化.结果:在激光共聚焦显微镜下,观察到释放绿色荧光的细胞群,转染成功;根据定量qPCR分析,HPV16编码基因E6和E7的mRNA表达水平明显下降,shRNA表达载体转染产生抑制效率;CDK4和BCL-2 mRNA表达水平明显下降,推测抑制HPV基因转录后,可能抑制宫颈癌细胞生长,引起细胞周期停滞;抑制E7基因表达后,CALCA和TFPI-2 mRNA表达水平明显上升,而抑制E6基因表达后,对上述基因表达水平的影响不明显.结论:HPV16编码蛋白质E7可能引起宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2基因表达下调,此为揭示依赖于HPV感染的宫颈癌发病机制提供了依据.