紫外线A辐射对人角质形成细胞的损伤作用

目的:研究紫外线A(UVA)辐射对人角质形成细胞(HaCaT)活力和凋亡的影响及损伤机制.方法:采用不同剂量(1、5、10、20、30、40 J/cm2) UVA照射HaCaT细胞建立急性UVA损伤细胞模型;采用四甲基噻唑蓝(MTT)法及流式细胞术分别检测UVA照射后对细胞活力和凋亡的影响;免疫荧光和Western blot分别检测细胞内γH2AX焦点形成及其蛋白表达水平;原子力显微镜直接观测DNA损伤断裂情况.结果:与对照组相比,5～30 J/cm2范围内,细胞活力随UVA照射剂量的增加而降低(P＜0.05),且呈现剂量-效应关系(r=0.982,P=0.009);UVA照射后20 h细胞凋亡率在10～40 J/cm2明显增加且有一定的量-效关系(r=0.936,P=0.008).在30和40J/cm2 UVA照射后,免疫荧光也可观察到明显的焦点形成;不同剂量照射后均可检测到磷酸化γH2AX蛋白的表达,在5和10 J/cm2UVA照射时磷酸化γH2AX蛋白表达增强最为明显;原子力显微镜观察到在30和40 J/cm2 UVA照射后细胞DNA与对照组相比有明显的断裂,并出现许多断片.结论:UVA可诱导DNA链断裂,引起细胞损伤,从而促进HaCaT细胞凋亡并抑制其存活.