cIAP1基因的 RNA 干扰载体的构建及其对卵巢癌细胞的生物学影响
Practical Oncology Journal(2015)
Abstract
目的:构建针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体并稳定转染人卵巢癌Skov3细胞,观察该基因对卵巢癌细胞的影响。方法设计合成针对cIAP1的shRNA重组质粒表达载体,并筛选出最有效的干扰序列,获取pGPU6-cIAP1-shRNA稳定表达细胞株。 RT-PCR及Western blot检测转染组Sk-ov3细胞cIAP1基因mRNA及蛋白表达的水平,MTT法检测细胞生长,绘制生长曲线。结果测序验证针对cIAP1的shRNA重组质粒构建成功,并筛选cIAP1-2534为最佳干扰序列;流式细胞术分析cIAP1 shR-NA载体的转染效率可达74.7%,RT-PCR及Western blot检测干扰组Skov3细胞的cIAP1基因mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。 MTT实验结果显示干扰组细胞的OD值显著低于正常组细胞(P<0.05),干扰组细胞的生长速度明显慢于正常组(P<0.05)。结论针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体可以有效抑制Skov3细胞中该基因的表达,cIAP1基因表达下调能在一定程度上抑制卵巢癌Skov3细胞的体外增殖能力及细胞侵袭能力。
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Key words
Cellular inhibitor of apoptosis protein 1 ( cIAP1 ),Ovarian cancer,RNA interference (RNAi)
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