cIAP1基因的 RNA 干扰载体的构建及其对卵巢癌细胞的生物学影响

目的：构建针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体并稳定转染人卵巢癌Skov3细胞，观察该基因对卵巢癌细胞的影响。方法设计合成针对cIAP1的shRNA重组质粒表达载体，并筛选出最有效的干扰序列，获取pGPU6－cIAP1－shRNA稳定表达细胞株。 RT－PCR及Western blot检测转染组Sk-ov3细胞cIAP1基因mRNA及蛋白表达的水平，MTT法检测细胞生长，绘制生长曲线。结果测序验证针对cIAP1的shRNA重组质粒构建成功，并筛选cIAP1－2534为最佳干扰序列；流式细胞术分析cIAP1 shR-NA载体的转染效率可达74．7％，RT－PCR及Western blot检测干扰组Skov3细胞的cIAP1基因mRNA及蛋白表达水平明显降低（P＜0．05）。 MTT实验结果显示干扰组细胞的OD值显著低于正常组细胞（P＜0．05），干扰组细胞的生长速度明显慢于正常组（P＜0．05）。结论针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体可以有效抑制Skov3细胞中该基因的表达，cIAP1基因表达下调能在一定程度上抑制卵巢癌Skov3细胞的体外增殖能力及细胞侵袭能力。