慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究
Neural Injury and Functional Reconstruction(2019)
Abstract
目的:探究慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的研究.方法:利用shRNA基因干扰技术,构建shRNA LINGO-1干扰载体,慢病毒转染BMSCs,根据病毒转染情况分成空白对照组(未转染慢病毒的BMSCs)、空载体病毒组(转染不含shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs)、干扰载体病毒组(转染shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs).利用流式细胞仪检测BMSCs的表面蛋白,利用RT-PCR和Western-Blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、巢蛋白的表达.结果:CD44和CD29在第2代BMSCs的表达为60.2%和58.3%;CD34和CD45在第2代BMSCs的表达为3.4%和2.6%.慢病毒转染效率为90%以上.空白对照组、空载体病毒组和干扰载体病毒组的GFAP、NSE、NF和巢蛋白mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05),其中空载体病毒组和空白对照组的比较差异无统计学意义(P>0.05),干扰载体病毒组和空载体病毒组的差异有统计学意义(P<0.05).Western-blot检测蛋白表达量也具有同样的表达特点.结论:慢病毒介导shRNA LIN-GO-1干扰载体转染促进BMSCs可提高BMSCs向神经细胞转化的效率.
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Key words
LINGO-1,bone marrow mesenchymal stem cells,lentivirus transfection,glial fibrillary acidic protein,neuron-specific enolase
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