小鼠骨髓间充质干细胞体外扩增和分化为神经元样细胞的实验研究

目的：体外分离和扩增小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs），并观察不同方法诱导BMSCs向神经元样细胞分化的差异，以寻找一种效果理想的BMSCs体外诱导方法。方法取昆明小鼠双股骨骨髓，采用全骨髓贴壁法体外纯化扩增 BMSCs，流式细胞术检测其表面标志物，并对其进行成脂、成骨诱导鉴定。分别用化学诱导法和共培养法诱导 BMSCs分化为神经元样细胞，比较两种方法所获得的神经元样细胞的细胞形态。结果采用全骨髓贴壁法能有效分离小鼠 BMSCs，随着传代次数的增加能得到逐渐纯化的BMSCs，而过多的传代次数则出现细胞生长速度缓慢、核固缩、脱离等衰老征象。流式细胞术检测结果显示P4代BMSCs阳性表达CD29和Sca-1，而阴性表达CD11b。具有成脂、成骨诱导分化的能力。共培养法诱导第5天可见神经细胞样形态且细胞突起数量较多并有分支；化学诱导法培养第7天细胞出现较长突起，形成神经样结构。结论采用全骨髓贴壁法能有效分离纯化小鼠BMSCs ，通过共培养法诱导BMSCs分化为神经元样细胞效果优于化学诱导法。