含GDNF基因真核载体的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的 构建含GDNF基因真核表达载体,并分析其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.方法 从SD大鼠脑中提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增GDNF基因,测序鉴定后将GDNF基因克隆入pCDNA3.1中,构建真核表达载体pCDNA3.1-GDNF;原代培养大鼠间充质干细胞,以脂质体介导法将构建好的真核表达载体pCD-NA3.1-GDNF转染至间充质干细胞;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot检测GDNF在间充质干细胞中的表达.结果 扩增的大鼠GDNF基因序列与GenBbank的参考序列完全一致,GDNF基因已经正确克隆到真核表达载体pCDNA3.1中;转染骨髓间充质干细胞4h后,GDNF的mRNA和蛋白能在细胞中正确表达.结论 pCDNA3.1-GDNF真核表达载体构建成功,并能在大鼠间充质干细胞中正确表达,这为下一步研究携带GDNF的骨髓间充质干细胞治疗癫痫奠定了实验基础.