CUY21EDITⅡ超级多脉冲活体/细胞电转化仪转染外源基因至神经干细胞的优化方案

目的:优化CUY21EDITⅡ电转仪介导真核表达载体pEGFP-N1转染大鼠来源的神经干细胞(NSCs)的转染条件,提高外源基因转染NSCs的转染效率,为后续试验提供基础.方法:在保持驱动电压(PdV)、脉冲时间、循环次数等条件不变的情况下,通过改变电转电压(PpV),将已构建好的表达绿色荧光蛋白的重组载体pEGFP-N1以CUY21 EDITII电转仪转染导入NSCs,转染后48 h在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率.结果:pEGFP-N1质粒在PpV为350 V,PdV为20V,脉冲时间为10 ms,循环次数为20次的转染条件下,可获得较理想的转染效率,转染效率平均为81.0％,细胞存活率为72.0％.结论:通过优化转染条件,CUY21 EDITⅡ电转仪能提高pEGFP-N1转染NSCs的转染效率,与脂质体相比优势明显.