应用高效液相色谱串联高分辨质谱鉴定人角质层神经酰胺的种类及其他脂类

目的 采用高效液相色谱串联高分辨质谱法建立无创检测角质层神经酰胺(Cer)种类及其他脂类的分析方法.方法 本实验选取4例健康人,应用氰基丙烯酸酯黏贴法取角质层皮肤样品,鉴定角质层神经酰胺种类,采用thermo Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨FT质谱,Ultimate3000高效液相色谱仪,BEH C18(100 ×2. lmm,1.7μm)色谱柱,柱温40℃,流动相 A = 60:40 ACN/H20 + 10mmol/L NH4HC02,0.1％ HC02H;B = 90:10 IPA/ACN + 10mmol/L NH4HC02,0.1％ HC02H.反向色谱柱,流速为0.3mL/min,梯度洗脱.质谱检测中采用电喷雾离子源(ESI),Full Mass ddMS2模式,一级分辨率70 000,二级分辨率17 500.数据采集后用全流程脂质分析软件(LipidSearch)进行数据分析.结果 实验对4个皮肤样品进行12种目标神经酰胺亚类半定量过程,可看出Q Exactive均能提到峰,且响应强度在105～107之间.对样品分别进行了正离子和负离子采集,Lipid Search软件进行搜库,除目标脂质外,正离子鉴定出高达300种以上其他脂质结果,以神经酰胺类和甘油三酯类为主;负离子鉴定出30种以上,均为神经酰胺类.结论 Q Exactive超高分辨液质联用及Lipid Search脂质组学软件可鉴定出表皮12亚类神经酰胺及其他脂质,高效灵敏,为后期健康或皮损表皮神经酰胺及其他脂类的定量分析奠定了基础,提供了简单快速的方法.