Fam114A1蛋白对黑素细胞生物学功能影响的初步研究

目的:初步探讨Fam114A1对黑素细胞生物学功能的影响。方法:以黑素瘤细胞A375为工具细胞株，通过慢病毒转染的方式构建稳定过表达和抑制Fam114A1蛋白的细胞株，即过表达组和表达抑制组，以转染空载慢病毒的A375细胞作为对照组。实时荧光定量PCR检测Fam114A1对黑素合成相关基因酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）、前黑素小体蛋白（PMEL）、小眼畸形相关转录因子（MITF）和多巴色素异构酶（DCT）mRNA表达的影响，Western印迹法检测TYR、MITF蛋白的表达，MTT法、Transwell迁移和黏附实验分别检测Fam114A1对A375细胞增殖活性、迁移细胞数及黏附能力的影响。统计分析采用单因素方差分析和Dunnett- t检验。 结果:荧光显微镜观察慢病毒转染效率均在90%左右。与对照组A375细胞Fam114A1相对表达水平（0.850 ± 0.120）相比，过表达组显著升高（1.507 ± 0.170， t = 5.888， P = 0.001），而表达抑制组显著降低（0.397 ± 0.120， t = 4.065， P = 0.007），成功构建稳定过表达和抑制Fam114A1的A375细胞株。实时荧光定量PCR及Western印迹结果显示，表达抑制组TYR和MITF mRNA及蛋白表达均显著低于对照组（均 P < 0.01），而过表达组TYR和MITF mRNA及蛋白表达与对照组差异无统计学意义（均 P > 0.05）。与对照组相比，表达抑制组细胞增殖活性和黏附能力显著增强（ P = 0.009、0.001），细胞迁移能力显著减弱（ P = 0.005），而过表达组仅细胞迁移能力显著增强（ P = 0.021）。 结论:Fam114A1可影响A375的增殖活性、迁移和黏附能力，且影响黑素合成相关蛋白TYR和MITF的表达，可能是一种参与调控黑素细胞生物学活性的功能蛋白。