SLE患者基因组DNA甲基化水平的检测

目的 构建甲基CpG结合域(MBD)蛋白检测分析SLE患者基因组DNA甲基化水平.方法 将重组表达质粒MBD-pET30b+转化大肠杆菌DH5a克隆扩增并测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)后接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达,表达产物包涵体经Ni-NTA亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western印迹鉴定蛋白表达.用此蛋白免疫染色人胚肾细胞后用荧光显微镜观察、免疫染色正常人(15例)和SLE患者(21例)外周血单核细胞后用流式细胞仪检测平均荧光强度.结果 克隆质粒测序结果与理论预期完全一致,SDS-PAGE显示在大肠杆菌中表达出分子量为46 000的目标蛋白,Western印迹显示目标蛋白带有His融合标签(氨基端)和HA标签(羧基端).荧光显微镜观察显示MBD蛋白能与细胞内的甲基化CpG基序特异性结合,流式细胞仪检测显示SLE患者DNA甲基化水平(9.32±1.33)明显低于正常人(11.66 ±1.04)(P<0.05),SLE患者DNA甲基化水平与SLE-DAI负相关(r=-0.78,P<0.01).结论 SLE患者DNA甲基化水平明显低于正常人.并与SLE-DAI负相关.