聪耳通窍剂干预豚鼠庆大霉素耳毒性聋作用的机制探讨

目的 探讨基于中医脾肾理论的中药聪耳通窍剂干预庆大霉素(gentamycin,GM)耳毒性聋作用与可能机制.方法 选择杂色成年豚鼠60只,随机分为正常对照组,GM对照组,中药+GM组,每组各20只.正常对照组按常规饲养至第11天期满;GM对照组按200mg/kg·d剂量,每天分两次连续注射9天,第11天终止饲养;中药+GM组按3.994g/kg·d剂量(1/2人工灌服,1/2自动饮用),预先服用聪耳通窍剂10天,然后在继续服用中药同时开始注射每天同等剂量GM,连续9天,第11天终止饲养.其中每组6只动物于第5、6、9天检测ABR评估听力;6只动物利用RT-PCR检测耳蜗SOD1;剩余8只动物用于全耳蜗基底膜铺片,琥珀酸脱氢酶染色,进行耳蜗毛细胞形态学研究,以及检测血清BUN和Cr,肾脏切片经苏木素-伊红染色,了解肾功能和肾组织病理变化,其中每组6只动物一侧肾脏应用western blot检测ASK-1、Trx、caspase-3.结果 正常对照组ABR阈值一直保持相对恒定正常范围.与正常对照组比较,GM对照组ABR阈值第5天即出现明显差异(P<0.05),与中药+GM组比较,第7天开始出现明显差异(P<0.05),随着天数增加,差异继续扩大(P<0.01).中药+GM组ABR阈值递增差异不显著(P>0.05).全耳蜗基底膜检查显示,正常对照组各回三排内、外毛细胞形态正常,数量完整,排列有序;GM对照组各回三排外毛细胞损毁严重,绝大部分细胞出现严重崩解不全,或凋亡缩小,但内毛细胞仍基本存在;中药+GM组各回三排外毛细胞除少量和散在崩解不全外,大多仍存留可辨,形态如常,内毛细胞仍保持完整,各回外毛细胞损毁状况明显少于GM对照组(P<0.01).中药+GM组对耳蜗SOD1表达明显高于正常对照组和GM对照组(P<0.01,P<0.05),而血清BUN和Cr含量则明显低于GM对照组(P<0.01).肾脏切片染色显示,与正常对照组比较,GM对照组肾小球和近曲肾小管等受损严重,病理改变明显,而中药+GM组则受损不明显,甚至基本保持正常.中药+GM组对肾组织ASK-1、caspase-3表达明显低于GM对照组(P<0.05),对Trx表达则明显高于GM对照组(P<0.05).结论 一定剂量GM连续使用可造成严重耳、肾毒性损害,耳蜗损害以外毛细胞为主要损害靶细胞,肾脏损害以肾小球和近曲小管为主.聪耳通窍剂具有显著防护GM耳、肾毒性损害作用,其作用机制与其抑制氧化应激反应,干预ROS介导的细胞死亡径路有关,而通过护肾,促进GM排泄,是其间接护耳的重要机制;中医脾肾理论防治耳聋具有科学基础和应用价值.