缓激肽对体外培养兔角膜内皮细胞增殖状况及对闭锁小带蛋白-1与相关性核酸结合蛋白表达的影响

目的 观察缓激肽(bradykinin,BK)对体外培养家兔角膜内皮细胞增殖及对紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)、闭锁小带蛋白-1相关性核酸结合蛋白(zonula occludens-l-associated nucleic-acid-binding protein,ZONAB)表达的影响,初步探讨BK促进角膜内皮细胞增殖的作用机制.方法 选择对数生长期的兔角膜内皮细胞,向培养基中分别加入0.01、0.10、1.00、10.00 μmol·L-1 BK(BK组),对照组不做加药处理,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化和增殖状况,MTT法检测各组细胞在24 h、48h、72 h、96 h的吸光度(A)值,Western blot检测72 h各组细胞中紧密连接处ZO-1与核内ZONAB蛋白的表达.结果 加药72 h,各组细胞融合成片并紧密连成单层,加药96 h后各组细胞生长受限,细胞间隙变大,脱落细胞增多.与对照组相比,除0.01 μmol·L-1 BK组24 h外,其余浓度BK处理后A值升高、增殖活力增强,差异均有统计学意义(均为P＜0.001),并呈现出一定的浓度依赖性,其中1μmol·L-1 BK作用最强(P＜0.001).Western blot结果显示BK可促进紧密连接处ZO-1与核内ZONAB蛋白的表达,且呈一定的浓度依赖性.结论 BK体外刺激可促进兔角膜内皮细胞的增殖,具有浓度和时间的依赖性,其作用机制可能与ZO-1与ZONAB介导的信号通路有关.